CRISPR/Cas9介导的外源基因靶向插入鸡EAV-HP基因组

• 作者: 张涛 杜伟立 杨理凯 王令 路宏朝 郭苗苗
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: CRISPR/Cas9 鸡内源性病毒 EAV-HP 整合位点 供体载体
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 236-243
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.180224

摘要

本研究旨在通过CRISPR/Cas9介导外源基因靶向插入鸡EAV-HP基因组.首先设计特异性引物并扩增鸡内源性病毒(EAV-HP)左右同源臂和增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因表达盒,然后通过重叠延伸PCR技术将两个同源臂DNA连接至eGFP表达盒两侧,获得全长DNA片段LER,并克隆至pMD 19-T载体,获得携带eGFP基因的供体载体pMDT-LER.随后在HEK293T细胞中验证供体载体pMDT-LER能成功表达eGFP后,将EAV-HP打靶载体和供体载体共转染至DF-1细胞,观察绿色荧光阳性细胞,提取细胞基因组,PCR检测外源基因eGFP成功整合至鸡基因组EAV-HP位点.最后,将转基因细胞DF-1传至第7代,用PCR和Western blotting检测eGFP在转基因细胞中稳定表达.丈中初步验证外源基因eGFP能整合至鸡EAV-HP位点并稳定表达,为转基因鸡的研究提供新整合位点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	路宏朝	陕西理工大学生物科学与工程学院	53	201	8.0	12.0
2	张涛	陕西理工大学生物科学与工程学院	91	350	9.0	13.0
3	王令	陕西理工大学生物科学与工程学院	24	31	4.0	4.0
4	杜伟立	陕西理工大学生物科学与工程学院	10	11	2.0	2.0
5	杨理凯	陕西理工大学生物科学与工程学院	6	4	1.0	1.0
6	郭苗苗	陕西理工大学生物科学与工程学院	4	2	1.0	1.0