人血小板CD36基因220C＞T和429+4insg变异真核表达载体的构建及表达

• 作者: 丁浩强 刘静 叶欣 夏文杰 徐秀章 王嘉励 邓晶 邵媛 陈大伟 陈扬凯
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 关键词: 血小板 CD36基因 变异 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 124-127
• 页数: 4页
• 字数: 2820字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2019.02.007

摘要

目的 构建人血小板CD36基因220C＞T和429+4insg变异的真核表达载体,并转染HEK293T细胞进行CD36蛋白的表达分析.方法 提取人血小板总RNA并逆转录为cDNA,经PCR扩增获得分别携带220C＞T和429+ 4insg基因变异的CD36基因片段;经TA克隆将目的基因片段连接到pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体并转化TOP10E.coli,蓝白斑筛选获得阳性质粒,提取质粒DNA进行测序分析;将分别含有220C＞T和429+4insg基因变异体的质粒DNA在effectene作用下转染HEK293T细胞;应用流式细胞术及Western印迹分别对220C＞T和429+ 4insg基因变异体的CD36蛋白表达进行鉴定分析.结果 通过TA克隆成功构建了pcDNA3.1/V5-His-CD36 (220C＞ T/429+ 4insg)真核表达载体,转染HEK293T细胞后,经流式细胞术和Western印迹分析,证实220C＞T和429+4insg基因变异可导致CD36蛋白在HEK293T细胞的缺失表达.结论 CD36基因220C＞T和429+4insg变异均可引起人血小板CD36的缺失表达,明确了220C＞T和429+ 4insg变异对CD36表达的影响,为其他CD36基因变异的研究奠定了基础.