应用CRISPR技术敲除MDA-MB-231细胞系的 NODAL基因的研究

• 作者: 倪玉芳 方天星 曾凡才 李念峰
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: CRISPR/Cas9 乳腺癌 基因敲除 NODAL基因
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 240-250
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0426

摘要

NODAL(Nodal growth differentiation factor)是一种细胞因子,为研究其功能,需建立敲除NODAL基因的细胞系.构建了两种作用于不同靶位点的CRISPR/Cas9表达载体和一种打靶载体,并通过电转法导入三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经嘌呤霉素抗性筛选和挑单细胞克隆,再应用PCR和测序技术鉴定基因型,以及Western Blot检测蛋白表达.将等位基因同源重组鉴定为阳性的8个单细胞克隆再经非同源重组和大片段缺失基因型鉴定,仅一个单细胞克隆的靶位点发生移码突变,4个单细胞克隆的靶位点有大片段缺失发生,4个单细胞克隆的靶位点检测到野生型等位基因.蛋白表达检测结果显示,仅有2个单细胞克隆未检测到NODAL蛋白表达,3个单细胞克隆的NODAL蛋白表达降低,另外3个单细胞克隆的NODAL蛋白表达无明显变化.最终获得了基因型和蛋白表达鉴定为敲除NODAL基因的单细胞克隆,为进一步研究NODAL在乳腺癌细胞中的分子机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李念峰	西南医科大学基础医学院生物化学与分子生物学实验室	2	2	1.0	1.0
2	方天星	西南医科大学基础医学院生物化学与分子生物学实验室	2	0	0.0	0.0
3	倪玉芳	西南医科大学基础医学院生物化学与分子生物学实验室	2	0	0.0	0.0
4	曾凡才	西南医科大学基础医学院生物化学与分子生物学实验室	7	2	1.0	1.0