裂谷热病毒eGn蛋白的制备及免疫原性验证

• 作者: 夏咸柱 张胜男 张颖 徐胜男 曹增国 杨松涛 毕津豪 焦翠翠 王化磊 赵永坤 迟航 金宏丽 韩秋雪 黄培
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 裂谷热病毒 Gn胞外区(eGn) 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1506-1512
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65|R535
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.08.15

摘要

通过PCR扩增裂谷热病毒(RVFV) Gn蛋白胞外区(eGn)基因,连入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-RVFV-eGn.将重组质粒转化至感受态BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经HisTrapTM FF蛋白纯化柱纯化目的蛋白.将目的蛋白免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,免疫荧光鉴定制备的单克隆抗体特性.结果 显示,PCR扩增出1 287 bp的目的基因;构建的重组质粒转化BL21细胞后可有效表达目的蛋白,确定最佳表达条件为30℃,0.8 mmol/L IPTG诱导5h,目的蛋白以包涵体形式表达;纯化后目的蛋白纯度为94.136％;制备的单克隆抗体可特异性识别哺乳动物细胞表达的Gn蛋白,表明RVFV eGn蛋白具有良好的免疫原性.研究结果为裂谷热新型疫苗和快速诊断试剂的研制奠定基础.