绿绒蒿SSR-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 冷秋思 屈燕 熊健 赵琬玥
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 绿绒蒿 SSR PCR体系优化
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 60-63
• 页数: 4页
• 分类号: Q949.95
• 字数: 2536字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.08.013

摘要

为建立适合绿绒蒿属(Meconopsis Vig.)的SSR反应体系,以多刺绿绒蒿(M.horridula)为试材,应用L25(56)进行正交试验,对影响SSR-PCR的主要因素进行优化.结果发现,Mg2+对PCR反应效果影响最大,而dNTPs的影响最小.5个因素水平的变化对绿绒蒿属SSR-PCR反应体系的影响从大到小依次为Mg2+>Taq酶含量>引物浓度>DNA模板量>dNTPs浓度.适宜绿绒蒿属的SSR反应体系:总体积25μL,Mg2+浓度2 mmol/L,dNTPs浓度0.2 mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,DNA模板量60 ng,Taq聚合酶量1.6 U,其余用ddH2 O补充.扩增程序为94℃1.5 min;94℃20 s,最适退火温度20 s,72℃1 min,共35个循环;72℃5 min;4℃ 保存.利用优化后的反应体系对同属另外8种绿绒蒿(M.wallichi、M.racemosa、M.lingholm、M.prattii、M.rudis、M.napaulensis Pinky、M.paniculata、M.superba)进行PCR扩增,均获得优良的扩增产物.因此,该试验建立的反应体系适用于绿绒蒿属植物的SSR-PCR反应.