ZFN,TALEN和CRISPR/Cas9在小鼠Rosa26基因定点整合外源基因的效率比较

• 作者: 丛佩清 何祖勇 刘小凤 刘小红 刘蔚 聂宇 陈瑶生
• 来源期刊: 中山大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 TALEN ZFN Rosa26 定点整合
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 137-144
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 字数: 4826字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13471/j.cnki.acta.snus.2020.02.016

摘要

哺乳动物黑色素的合成依赖于酪氨酸的氧化作用,而酪氨酸酶(Tyr)是催化酪氨酸氧化反应的关键酶,当外源Tyr基因整合进白毛色小鼠基因组中,会使它获得黑色素合成的能力,表现出与原来不同的毛色表型.为方便、快捷地获得Tyr基因整合的小鼠,构建了一个无启动子的pTyr-2A-DsRed同源重组质粒供体,选择Rosa26的第一个内含子作为外源基因整合的靶位点,设计了切割位点几乎一致的ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9系统.通过流式对比分析C2 C12细胞中红色荧光蛋白DsRed的表达水平,比较了3种基因组编辑工具介导的外源基因定点整合效率,结果发现CRISPR/Cas9的效率最高,在此基础上,利用CRISPR/Cas9将供体整合到小鼠胚胎干细胞中,筛选单细胞克隆进行囊胚腔注射和胚胎移植,获得一只存活的嵌合体小鼠,表现出白毛中夹杂黑毛的表型,表明整合到小鼠Rosa26的Tyr基因可以正常表达.