辣椒疫霉PcCRN20-C蛋白的表达纯化及结晶

• 作者: 刘应保 孙文秀 张修国 朱彤彤 杨磊
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 辣椒疫霉 皱缩坏死蛋白 蛋白质纯化结晶 X-射线衍射
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 116-123
• 页数: 8页
• 分类号: S432.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.1906036

摘要

CRN(crinkling and necrosis-inducing protein)为疫霉菌在与寄主互作过程中分泌的一类特有胞质效应因子,干扰寄主细胞正常的生理代谢和功能.采用PCR法从辣椒疫霉LT1534菌株cDNA中克隆PcCRN20-C基因.该基因序列长783bp,编码261个氨基酸.构建重组表达载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3).在优化条件下诱导表达重组蛋白,利用Ni-NTA金属螯合层析、离子交换层析、分子筛层析和胰蛋白酶酶解技术获得高纯目的蛋白,SDS-PAGE分析表明,蛋白质分子量约为25kDa.采用座滴气相扩散法进行晶体制备和筛选,成功获得了蛋白质晶体,并通过X-射线衍射仪收集了晶体衍射花样.结合蛋白质晶体学方法,获得了有衍射的辣椒疫霉PcCRN20-C蛋白晶体,为进一步研究CRN蛋白的结构与病原菌致病机制提供参考资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙文秀	长江大学生命科学学院	35	108	6.0	8.0
2	杨磊	长江大学生命科学学院	11	24	3.0	4.0
3	张修国	山东农业大学植物保护学院	56	500	13.0	20.0
4	朱彤彤	长江大学生命科学学院	3	1	1.0	1.0
5	刘应保	长江大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0