辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白 的原核表达、纯化及结晶

• 作者: 兰玉彬 王会征
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 辣椒疫霉菌 葡聚糖酶抑制蛋白(GIP) 原核表达 纯化 结晶
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 植物保护·农业气象
• 页码范围: 111-116
• 页数: 6页
• 分类号: S432.4+4|Q78
• 字数: 4330字
• 语种: 中文
• DOI: 10.14083/j.issn.1001-4942.2019.10.021

摘要

葡聚糖酶抑制蛋白(GIP)是辣椒疫霉菌在病理环境下诱导产生的一类蛋白,是病原菌抗性蛋白的一种.本研究根据辣椒疫霉菌全基因组序列,通过生物信息学分析、序列比对获得葡聚糖酶抑制蛋白全长基因序列.以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因组为模板扩增GIP基因cDNA,并对其进行相关生物信息学分析.基因经测序验证后与载体pET28a(+)连接,构建好的重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli Rosetta),用IPTG诱导表达重组蛋白6×His-GIP.重组蛋白在5 mol/L尿素变性环境下进行亲和层析纯化,对纯蛋白进行透析、复性、浓缩后进行分子排阻层析纯化,并对获得的纯蛋白进行蛋白结晶试验,为进一步阐明GIP作用机理奠定基础.