内切葡聚糖酶基因的克隆及原核表达

• 作者: 孙旸 张明磊 王刚 苗会 陈光
• 来源期刊: 吉林农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 解淀粉芽孢杆菌 内切葡聚糖酶基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 页码范围: 538-542
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13327/j.jjlau.2016.3353

摘要

纤维素酶的工业应用一直受成本高、酶活低的限制,而内切葡聚糖酶作为纤维素酶最主要的组成部分,提高内切葡聚糖酶的酶活力显得尤为重要.根据GenBank中收录的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolique-faciens)KCTC的模式菌株和解淀粉芽孢杆菌HZ79内切葡聚糖酶序列的相似性及orf分析设计特异性引物,以解淀粉芽孢杆菌的基因组DNA为模板,利用PCR反应克隆出长为1 500 bp的内切葡聚糖酶基因(egl基因),将目的基因与pMD19-T载体相连,转入大肠杆菌DH5α,阳性克隆经菌液PCR及双酶切验证,将验证正确的质粒送金唯智测序公司测序.比对结果表明:该克隆片段无碱基缺失,无移码突变,扩增序列准确、可靠.将测序正确的重组质粒转化BL21,进行大肠杆菌BL21(DE3)的原核表达,SDS-PAGE分析蛋白的大小为55 ku,等电点为8.12.为后续的内切葡聚糖酶基因突变体文库的建立,及egl酶酶活力及耐受性提高菌株的高通量筛选奠定前期基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈光	吉林农业大学生命科学学院	175	1299	19.0	26.0
2	王刚	吉林农业大学生命科学学院	47	314	9.0	16.0
3	孙旸	吉林农业大学生命科学学院	52	349	11.0	16.0
4	苗会	吉林农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
5	张明磊	吉林农业大学生命科学学院	5	10	2.0	3.0