三疣梭子蟹Apaf-1基因的克隆及其在低盐和病原胁迫后的表达分析木

• 作者: 任宪云 刘萍 吕建建 孙东方 宋柳 王磊 高保全
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 三疣梭子蟹 Apaf-1 低盐度胁迫 副溶血弧菌 WSSV
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 85-93
• 页数: 9页
• 分类号: S917
• 字数: 6290字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20190418001

摘要

本研究利用RACE方法克隆获得三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)凋亡蛋白酶激活因子-1(Apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)基因,该基因cDNA全长为2032 bp,其中,ORF为1050 bp,编码349个氨基酸,预测分子量为39.13 kDa,理论等电点为7.67.同源性和系统发育分析显示,Apaf-1与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) Apaf-1的同源性最高,为51.27％,并与凡纳滨对虾聚为一支.组织表达分析显示,Apaf-1基因的相对表达水平在肝胰脏最高,其次是肌肉、心脏、鳃和眼柄,血细胞和表皮最低.不同盐度胁迫后,Apaf-1在Ⅱ期幼蟹体内表达水平在3h达到最大值,此后,呈先下降再上升趋势;Apaf-1在80日龄盐度20胁迫后三疣梭子蟹的鳃中呈上升趋势,在肝胰腺中为先上升后下降趋势,表明盐度改变能影响该基因在鳃和肝胰腺组织中的表达.不同病原感染实验结果显示,在血细胞中,注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)后Apaf-1的表达于48 h到达峰值,为对照组的2.76倍(P＜0.05),注射白斑综合征病毒(WSSV)后,仅在12h表达水平上调,为对照组的1.25倍(P＜0.05);在肝胰腺中,注射副溶血弧菌后在72 h到达峰值,为对照组的5.44倍(P＜0.05),注射WSSV后在12 h到达峰值,为对照组的5.89倍(P＜0.05),整体呈上调表达趋势.本研究为进一步理解三疣梭子蟹Apaf-1基因的生理功能提供了参考.