帕利亚姆血清群病毒一步法RT-PCR检测技术的建立

• 作者: 廖德芳 张洁 李华春 李占鸿 杨恒 杨振兴 肖雷
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 帕利亚姆血清群病毒 一步法RT-PCR 检测技术 建立
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 诊断和检测技术
• 页码范围: 40-45
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3790字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201905020

摘要

帕利亚姆血清群病毒(PALV)在我国广泛流行,给我国牛羊养殖业健康发展构成了严重威胁,目前国内尚无PALV核酸检测方法的报道.本研究根据流行于我国的中山病毒(CHUV)、Bunyip Creek virus (BCV)和D'Aguilar virus (DAV)3种血清型PALV的Seg-7保守基因序列,设计针对PALV的群特异性RT-PCR扩增引物,通过反应条件优化,建立了PALV的一步法RT-PCR检测方法,其最佳引物浓度为0.8μmol/L;最佳退火温度为56℃.对该方法进行特异性试验,结果显示该方法可特异性的检测出CHUV、BCV和DAV核酸,而对环状病毒属的蓝舌病病毒、流行性出血病病毒、非洲马瘟病毒和广西环状病毒的检测结果均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对RNA标准品的最低检测限为6.9×101拷贝/μL.利用该方法检测血液样品,结果显示该方法检测结果与病毒分离结果基本一致.本研究建立的PALV一步法RT-PCR方法具有特异性强、敏感度高等优点,为开展PALV感染疫病诊断与流行病学研究提供了技术保障.