A群轮状病毒一步法RT-ddPCR方法的建立

• 作者: 付溥博 刘莉 张西萌 徐蕾蕊 曾静 李丹 汪琦 赵晓娟 马丹 魏咏新 魏海燕
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 医学
• 关键词: A群轮状病毒 一步法反转录微滴式数字聚合酶链式反应 定量检测 食品基质
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 安全检测
• 页码范围: 292-297
• 页数: 6页
• 分类号: R155.5
• 字数: 5804字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20190218-091

摘要

目的:建立A群轮状病毒(rotavirus,RV)一步法反转录微滴式数字聚合酶链式反应(reverse transcriptase droplet digital polymerase chain reaction,RT-ddPCR)方法.方法:筛选特异性引物探针,建立并优化一步法RT-ddPCR方法,确定特异性;制备含A群RV目的片段的RNA标准物质,确定建立方法的检测限、准确度、重复性和复现性.A群RV阳性粪便样品梯度稀释后制作染毒液,制备人工染毒样品,分离病毒与食品基质,浓缩得到病毒悬液,提取RNA后,比较不同食品基质中一步法RT-ddPCR检测结果.结果:建立的一步法RT-ddPCR方法定量限为58000.00～5.80拷贝/μL,具有良好的特异性、准确性、灵敏度、重复性和复现性.各染毒水平下A群RV检出量和回收率在不同食品基质中存在显著性差异(P<0.05).结论:研究建立的一步法RT-ddPCR方法可准确定量A群RV RNA,食品基质可影响一步法RT-ddPCR检测结果,通过病毒回收率可计算食品中A群RV的实际载量.