洪湖碘泡虫SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用

• 作者: 刘新华 章晋勇 罗丹 赵媛莉
• 来源期刊: 水生生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 洪湖碘泡虫 异育银鲫 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 监测
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 页码范围: 268-274
• 页数: 7页
• 分类号: Q941.4
• 字数: 6823字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7541/2020.032

摘要

洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)引起的鲫"喉孢子虫病"严重危害我国异育银鲫养殖.病原丰度是决定病害发生的最重要因素之一,因此建立洪湖碘泡虫的定量检测方法,不仅可用于异育银鲫"喉孢子虫病"的早期诊断,也可应用于养殖系统中洪湖碘泡虫的定量监测,为该病的暴发风险预警及防控措施的效果评价提供技术手段.研究根据洪湖碘泡虫的ITS基因序列,设计合成一对特异性引物HHF/R,建立了洪湖碘泡虫的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性及应用性进行了验证.结果显示,该方法能特异性检测出洪湖碘泡虫,而与多涅茨尾孢虫、倪李碘泡虫、普洛宁碘泡虫、吴李碘泡虫之间无交叉反应;最低检测限为3.02×101copies/μL,灵敏性较常规PCR高出1000倍;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2％.应用该方法可定量检出洪湖碘泡虫全生活史阶段,包括鱼体内移行发育的前孢子阶段及养殖系统环境,如池塘水样及底泥样品中分布的洪湖碘泡虫.因此,所建立的洪湖碘泡虫SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性稳定,可应用于异育银鲫全养殖阶段洪湖碘泡虫的定性、定量监测.