利用Crispr/Cas9技术构建影响先天性心脏病关键基因的表达载体

• 作者: 宗渊 张帆 徐登 武建英 马伟
• 来源期刊: 兰州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: Crispr/Cas9 先天性心脏病 关键基因 表达载体
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 72-76
• 页数: 5页
• 分类号: R969.1
• 字数: 3180字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13885/j.issn.1000-2812.2020.01.014

摘要

目的 利用Crispr/Cas9技术构建影响先天性心脏病关键基因表达载体,为后续基因编辑工作做好前期分子实验基础.方法 利用NCBI数据库检索调控先天性心脏病关键基因NKX2-5、GATA4、TBX5,通过生物软件在线设计3个基因对应的sgRNA.对慢性病毒载体lentiCRISPRv2进行BsmB I单酶切,通过胶回收获得线性化载体.利用T4连接酶将处理后的双链sgRNA和载体连接,通过大肠杆菌转化、质粒提取和测序最终得到lentiCRISPRv2-NKX2-5、lenti-CRISPRv2-GATA4、lentiCRISPRv2-TBX53种病毒表达载体.结果 获得评分最高且碱基数量合适的sgRNA,通过对表达载体的线性化酶切,成功去除载体中2000 bp左右的置换片段,对连接后的载体测序显示双链sgRNA与病毒表达载体置换片段序列一致.结论 利用Crispr/Cas9可成功构建先天性心脏病关键基因NKX2-5、GATA4、TBX5病毒表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	武建英	青海大学附属医院心脏外科	34	80	5.0	8.0
2	马伟	青海大学附属医院心脏外科	17	15	3.0	3.0
3	徐登	青海大学研究生院	2	0	0.0	0.0
5	张帆	青海大学研究生院	1	0	0.0	0.0
9	宗渊	青海大学研究生院	1	0	0.0	0.0