热稳定性丙酮酸:铁氧还蛋白氧化还原酶异源表达及其在乙酰辅酶A合成中的应用

• 作者: 乐易林 倪黎 傅毓 孙建中
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 大肠杆菌 重组表达 嗜热酶 嗜热菌 合成乙酰辅酶A
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 72-78
• 页数: 7页
• 分类号: Q946.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.1908013

摘要

乙酰辅酶A被广泛应用到生物医学研究中,使用TPP代替昂贵的ATP为辅因子合成乙酰辅酶A受到广泛关注.新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)来源的丙酮酸:铁氧还蛋白氧化还原酶(TnPFOR)在大肠杆菌中进行了重组表达,分析了其酶学特性,并探讨了利用嗜热酶(TnPFOR)酶法合成乙酰辅酶A.采用pET-20b(+)载体,将新阿波罗栖热袍菌来源的四亚基组成的嗜热酶(TnPFOR)在大肠杆菌中进行异源表达;通过热处理和阴离子交换层析法纯化嗜热酶(TnPFOR);重组表达的嗜热酶(TnPFOR)的最适反应温度和pH分别为90℃和6.5,TnPFOR在90℃下孵育1h时保留了50％活性.利用嗜热酶(TnPFOR),以TPP为辅酶合成了乙酰辅酶A,并探讨了不同温度、丙酮酸钠底物浓度和反应时间对乙酰辅酶A合成的影响.得到的优化条件为:最适反应温度为90℃,丙酮酸钠浓度为1.5mmoL/L,反应时间为2min.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙建中	江苏大学环境与安全工程学院生物质能源研究所	27	110	6.0	10.0
2	乐易林	江苏大学环境与安全工程学院生物质能源研究所	6	11	2.0	3.0
3	傅毓	江苏大学环境与安全工程学院生物质能源研究所	1	0	0.0	0.0
4	倪黎	江苏大学环境与安全工程学院生物质能源研究所	2	1	1.0	1.0