谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因强启动子的鉴定

• 作者: 张献 张玮祎 徐大庆 李川敏 牛树启 臧卫平
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 谷氨酸棒杆菌 二维电泳 强启动子 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 页码范围: 69-75
• 页数: 7页
• 分类号: Q71
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2020.0032

摘要

鉴定强启动子可为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)代谢工程育种及重组蛋白生产提供高效的基因表达调控元件,但谷氨酸棒杆菌内源性强启动子的鉴定鲜有报道.本试验进行谷氨酸棒杆菌ATCC13032菌株细胞全蛋白二维电泳并对高表达蛋白质斑点进行质谱分析,选取分子量大小约为30 kDa、等电点约为4.6的斑点作为研究对象,分析其所对应蛋白编码基因的启动子.启动子预测结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864转录活性强.将强启动子Ptac-M和启动子P0864分别插入启动子探测载体pDXW-11,转化ATCC13032菌株感受态细胞,获得工程菌株C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864.氯霉素耐受性试验结果显示,菌株C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864的氯霉素耐受性分别为30和40μg/mL;报告蛋白CAT氯霉素酰基转移酶活性检测结果显示,C.glutamicum/pDXW-11-Ptac-M和C.glutamicum/pDXW-11-P0864菌株细胞抽提物上清液CAT蛋白氯霉素酰基转移酶比活力分别为4.50和6.12 U/mg;氯霉素乙酰基转移酶基因cat转录水平的荧光定量PCR试验检测结果显示,cat基因在启动子P0864的控制下,其转录水平是在Ptac-M控制下转录水平的1.84倍.以上结果表明,谷氨酸棒杆菌Cgl0864基因启动子P0864是强启动子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	臧卫平		4	1	1.0	1.0
2	牛树启		4	23	3.0	4.0
3	徐大庆	河北农业大学生命科学学院	19	425	6.0	19.0
4	张献	河北农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
5	张玮祎	河北农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
6	李川敏	河北农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0