双链RNA饲喂干扰家蝇CYP6D1基因表达方法的建立

• 作者: 孔庆鑫 曹阳 沈林海 王英红 韦凌娅
• 来源期刊: 中国媒介生物学及控制杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 家蝇 CYP6D1基因 RNA干扰 抗药性
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 430-432
• 页数: 3页
• 分类号: R384.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11853/j.issn.1003.8280.2020.04.010

摘要

目的 利用饲喂双链RNA(dsRNA)对家蝇拟除虫菊酯抗性相关基因CYP6D1的表达进行干扰,并对干扰效果进行评价.方法 化学合成家蝇CYP6D1基因,连接入载体质粒L4440,转化入大肠埃希菌DH5α扩增质粒.抽提质粒,将其转化到大肠埃希菌HT115 (DE3),并在异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下表达CYP6D1基因的dsRNA.将含有CYP6D1基因dsRNA的HT115(DE3)饲喂家蝇,72 h后通过荧光相对定量技术评价家蝇体内CYP6D1基因的表达变化.未进行质粒L4440转化的大肠埃希菌菌株HT115(DE3)饲喂家蝇作为对照.结果 采用2-ΔΔCt法对对照组和处理组的mRNA相对表达量进行定量.目的基因和内参基因标准曲线R2值均＞0.99,扩增效率M值均在0.90～1.10之间.与对照组相比,处理组CYP6D1基因mRNA相对表达量下降了40.1％,两者之间差异有统计学意义(t=-11.377,P=0.008).结论 初步建立了饲喂dsRNA对家蝇拟除虫菊酯抗性基因CYP6D1表达进行干扰的方法,在mRNA水平上实现基因表达干扰效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔庆鑫	杭州市疾病预防控制中心消毒监测与病媒生物防制所	42	300	8.0	16.0
2	沈林海	杭州市疾病预防控制中心消毒监测与病媒生物防制所	23	76	5.0	7.0
3	韦凌娅	杭州市疾病预防控制中心消毒监测与病媒生物防制所	35	125	6.0	9.0
4	王英红	杭州市疾病预防控制中心消毒监测与病媒生物防制所	11	20	2.0	3.0
5	曹阳	杭州市疾病预防控制中心消毒监测与病媒生物防制所	7	1	1.0	1.0