小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用

• 作者: 付瑞 岳秉飞 巩薇 李威 李晓波 王吉 王淑菁 王莎莎 秦骁 贺争鸣 黄宗文
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠肝炎病毒 实时荧光定量PCR方法 啮齿类动物
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 95-103
• 页数: 9页
• 分类号: R372|Q93-335
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2020.02.002

摘要

目的 建立小鼠肝炎病毒(MHV)实时荧光定量PCR检测方法,并初步应用于实验裸鼹鼠等啮齿类动物的检测.方法 选择MHV E基因保守区域设计合成特异性引物和探针,建立荧光定量PCR方法,并对方法特异度、敏感度、线性、重复性和稳定性进行方法学验证.同时用建立的方法对79只清洁级小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼹鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠进行MHV检测.结果 成功建立了MHV实时荧光定量PCR方法;方法的线性范围为(1×101 ～1×109)拷贝/μL,与仙台(SV)病毒、呼肠孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠状病毒(BCV)均无交叉反应,方法的检测敏感度为10拷贝/μL.重复性和稳定性试验显示实验间变异系数均小于5％.检测结果显示63只裸鼹鼠、35只SPF小鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠均为阴性.79只清洁级小鼠MHV阳性率为22.78％.建立的方法与RT-PCR比较,可信度达97.47％.结论 建立的MHV荧光定量PCR方法特异、敏感,能够对多种啮齿类动物体内携带的MHV进行检测.