干扰Smad3促进山羊脂肪细胞分化

• 作者: 崔胜 朱江江 林亚秋 王永 许晴
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊 Smad3 基因克隆 RNA干扰 肌内脂肪细胞 皮下脂肪细胞
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 475-489
• 页数: 15页
• 分类号: S827.2|S813.3
• 字数: 8059字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.03.008

摘要

旨在克隆山羊Smad3的基础上,明确其组织和细胞表达谱,最终阐明干扰Smad3基因对山羊肌内和皮下脂肪细胞分化的影响.本研究选用5只体况良好的1周龄简州大耳羊,空腹24 h后屠宰并采集相应组织和细胞进行试验.利用RT-PCR技术克隆山羊Smad3基因cDNA区序列并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术检测Smad3基因的组织和细胞时序表达水平;并且合成靶向Smad3的siRNA,采用油红O染色从形态学上明确干扰Smad3对山羊前体脂肪细胞成脂分化的影响,利用qPCR检测干扰Smad3对脂肪细胞分化标志基因C/EB Pα、C/EB Pβ、LPL、SREBP1、AP2、PPARγ、Pref-1、KLF3、KLF4、KLF6、KLF7、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15以及Smads相关基因Smad2、Smad4、smad7和TGF-β1基因mRNA表达水平的影响,探讨可能的作用机制.结果,获得山羊Smad3基因1 449 bp,其中CDS区序列为1 278 bp,编码425个氨基酸;Smad3在山羊各组织中具有广泛表达特性,且在肾脏中的表达水平最高(P＜0.01);Smacl3均在山羊肌内和皮下两种脂肪细胞诱导分化的36 h表达量最低,极显著低于在未分化前体脂肪细胞中的表达丰度(P＜0.01);干扰Smad3后发现显著促进了山羊肌内和皮下脂肪细胞中脂滴的聚集,且脂肪细胞分化标志基因、KL F3、KLF4、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15的表达水平显著上升(P＜0.05),Pref-1的相对表达水平极显著下降(P＜0.01),同时干扰Smad3基因下调了Smad2、Smad4和Smad7基因的相对表达水平(P＜0.05).研究结果指出,干扰Smad3促进山羊脂肪细胞分化,且可能通过调控脂肪细胞分化标志基因C/EBPa、C/EBPβ、LPL、SREBP1、AP2、Pref-1、KLF3、KLF4、KLF8、KLF9、KLF10和KLF15等及协同Smad2、smad4和Smad7的表达来实现的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱江江	西南民族大学生命科学与技术学院	12	3	1.0	1.0