实时荧光定量RT-P CR方法在登革热小鼠模型中的评估及应用

• 作者: 佟巍 李丹 王卫 蔡方舟 郭智 陈倩 鲍琳琳
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 登革热 小鼠模型 实时荧光定量PCR TaqMan探针 定量检测
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 25-31
• 页数: 7页
• 分类号: R-33
• 字数: 4962字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2020.03.005

摘要

目的 评估登革病毒实时荧光定量RT-PCR方法,应用于登革热小鼠模型关键指标的检测.方法首先,选择合适的特异引物和探针,分子生物方法制备质粒标准品,优化PCR体系和反应条件;其次,评估该实时荧光定量RT-PCR方法的灵敏性、特异性及稳定性;最后,验证该方法对登革病毒感染小鼠血清和组织样本的适用性.结果成功确定一步法实时荧光定量RT-PCR方法;该方法较为灵敏,最低检测线为49.6 Copies/μL;方法特异性好,未见非特异性扩增;方法稳定性好,样本Ct值标准差均小于0.5,且CV﹤5％;登革病毒感染小鼠模型样品的检测结果符合实验预期.结论该qRT-PCR方法可作为关键指标检测方法,用于登革热小鼠模型病毒的定量检测及评估.