小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒多重荧光RT-LAMP鉴别检测方法的建立及应用

• 作者: 刘加波 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 蓝舌病病毒 多重荧光RT-LAMP 检测
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4733字
• 语种: 中文

摘要

旨在建立一种可视化多重荧光RT-LAMP方法用于检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的核酸,并初步应用于小反刍兽疫和蓝舌病临床样品的检测.比对GenBank中小反刍兽疫N基因和蓝舌病NS3基因保守区域,设计2套LAMP引物,在每条内引物FIP的5'端标记荧光基团.对反应条件进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和干扰性,同时应用该方法检测168份临床样品.结果表明,该方法对小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒高度特异,与口蹄疫病毒、鹿流行性出血热病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反刍动物病毒均无交叉反应,检测灵敏度为200 copies/μL,干扰性小,可同时检测两个不同浓度的模板.对168份样品的检测结果显示,小反刍兽疫病毒的感染率为3.6％,蓝舌病病毒的感染率为13.1％,无两种病毒混合感染;与荧光RT-PCR方法相比,此多重荧光RT-LAMP方法敏感性为91.7％～100％,特异性为100％.表明建立的多重荧光RT-LAMP可快速、准确地检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒,具有较好的临床应用价值.