鸭坦布苏病毒、鸭肠炎病毒和番鸭细小病毒TaqMan三重实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用

• 作者: 吴双 吴植 姜勇 宋海港 徐建生 朱善元 谢军 高悦 魏若瑶
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭坦布苏病毒 鸭肠炎病毒 番鸭细小病毒 TaqMan实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 626-633
• 页数: 8页
• 分类号: S834
• 字数: 5520字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2020.03.014

摘要

本研究旨在建立一种快速、敏感和高特异性检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭肠炎病毒(DEV)和番鸭细小病毒(MDPV)的TaqMan三重实时荧光定量PCR(q-PCR)的诊断方法并应用于临床疑似样品检测.根据DT-MUV的E基因、DEV的UL2基因和MDPV的VP3基因保守区域,分别设计合成了3对特异性引物和探针,在建立单重q-PCR方法的基础上建立了三重q-PCR方法.运用三重q-PCR方法对198份来自江苏和安徽的鸭组织疑似病料进行检测,结果表明,建立的TaqMan三重q-PCR可同时检测这3种病毒,检测灵敏度至少达100个拷贝,相关系数(R2)均在0.99以上,扩增效率为90％～110％.同时,该方法对H9亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、鸭甲肝病毒Ⅰ型(DHAV-1)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、新城疫病毒(NDV)、鹅细小病毒(GPV)的检测均为阴性,表明该方法具备特异性强、灵敏度高、重复性好和快速等优点.与常规PCR检测方法相比,三重q-PCR方法灵敏度大约高100倍.临床疑似样品检测结果表明DTMUV的检出率最高,3种病毒混合感染亦常见.建立的TaqMan三重q-PCR检测方法为DTMUV、DEV和MDPV的临床样品检测提供了快速、有效、特异和灵敏的工具,也为临床分子流行病学调查及定量分析奠定了基础.