日本脑炎病毒NS1蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘朝霞 周登元 宋云峰 曹胜波 杨克露 裴超 陈焕春
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 日本脑炎病毒 NS1蛋白 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 研究资源与技术改进
• 页码范围: 1322-1330
• 页数: 9页
• 分类号: S855.3
• 字数: 7003字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.07.019

摘要

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是危害人民健康的一种重要人畜共患病原,仍然缺乏敏感性高的抗原检测方法.NS1蛋白是JEV表达的一种分泌性蛋白,是该病毒诊断的理想靶标.本研究用构建的非结构蛋白1(non-structural protein 1,NS1)单克隆抗体,建立了可检测NS1蛋白的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)方法.用针对JEV NS1蛋白不同位点的单克隆抗体杂交瘤细胞株(5H2和2F6)制备腹水,经Protein G纯化后,以5H2包被酶标板作为捕获抗体,HRP标记的2F6为检测抗体.ELISA条件优化的结果显示,捕获抗体和酶标抗体最佳浓度分别为25和2.296μg/mL.用该方法检测系列稀释的NS1蛋白,蛋白浓度范围在78.125～625.000 ng/mL时,检测OD450值和蛋白浓度之间具有良好的线性关系,说明该方法可用于NS1蛋白的定量检测.用该方法检测猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒等均显示阴性,说明特异性良好.重复性试验结果显示,该方法批内重复性为0.7％～2.6％,批间重复性为0.6％～2.1％.用该方法检测了JEV感染的小鼠(Mus musculus)脑组织匀浆,在小鼠发病期可明显检测到NS1蛋白.本研究建立了检测JEV NS1蛋白的ELISA方法,为该病毒的诊断提供了一种工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈焕春	华中农业大学动物医学院	331	4866	36.0	53.0
2	宋云峰	华中农业大学动物医学院	13	139	6.0	11.0
3	曹胜波	华中农业大学动物医学院	36	641	13.0	25.0
4	裴超	华中农业大学动物医学院	2	0	0.0	0.0
5	杨克露	华中农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0
6	刘朝霞	华中农业大学动物医学院	2	3	1.0	1.0
7	周登元	华中农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0