猪流行性腹泻病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

• 作者: 夏小静1 姜金庆1 李任峰1 王异民1 王晓斐1 王自良1 田香勤2 韩笑1
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 52-57
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在采用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的核衣壳蛋白(N),并进一步制备其单克隆抗体.将构建重组原核表达质粒pET28a-N转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用Ni-NTA亲和层析和分子筛进行纯化.将纯化后的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对其分泌抗体的特性进行了分析.结果显示:重组质粒pET28a-N在E.coli BL21中高效表达,筛选获得了2株稳定分泌抗N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A3和4F6,其分泌的抗体均为IgG1亚型,腹水效价分别为5.12×105、1.28×105.本研究为进一步研究N蛋白的功能以及建立PEDV免疫学诊断方法奠定了基础.