犬小孢子菌FSH1基因干扰载体的构建及验证

• 作者: 吴英 张芙蓉 杨国玲 谭灿 郭春梅
• 来源期刊: 中国真菌学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 犬小孢子菌 RNA干扰 根癌农杆菌 丝氨酸水解酶1 头癣
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 354-358
• 页数: 5页
• 分类号: R379.2
• 语种: 中文

摘要

目的 为了构建犬小孢子菌FSH1基因的R N A干扰重组质粒,并验证其干扰效率.方法 以犬小孢子菌FSH1基因全长cDNA为模板,利用PCR技术扩增FSH1基因,将质粒pUC-PUT进行双酶切使其线性化,插入FSH1正向及反向干扰序列,获得中间载体pUC-PFUFT,将其及质粒pCB-309双酶切后连接,构建干扰载体pCB309-PFULFT.将其转化根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)EHA105,获得犬小孢子菌FSH1基因RNA干扰的转化体系.用实时定量PCR方法对犬小孢子菌FSH1基因干扰前后表达量进行鉴定.结果 成功构建了FSH1基因的干扰载体pCB309-PFULFT,获得FSH1基因的干扰转化子;犬小孢子菌野生株干扰后FSH1基因m R N A相对表达量较干扰前下降约70％,标准株下降约60％.结论 本试验成功构建了犬小孢子菌FSH1基因的干扰载体,为后续研究FSH1基因的功能及在头癣中的发病机制奠定了基础.