酵母重组表达PCV2病毒样颗粒的纯化工艺

• 作者: 谢晋 杨德强 周峻岗 李翊峰 吕红
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 马克斯克鲁维酵母 猪圆环病毒 病毒样颗粒 浊度 纯化
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 页码范围: 685-694
• 页数: 10页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文

摘要

猪圆环病毒(PCV)是一种引起断奶仔猪多系统衰竭综合征、呼吸道综合征及繁殖障碍的病毒,已经成为危害养猪业最主要的病原之一,而接种猪圆环病毒2型(PCV2)疫苗是控制猪圆环病毒相关疾病最有效的措施.利用马克斯克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus,KM)表达猪圆环病毒PCV2 Cap的产量可达2 g/L,高于其他表达系统的产量,并且重组表达的Cap蛋白在胞内能高效自组装成病毒样颗粒(Virus-Like Particles,VLPs).酵母细胞破碎之后样品中含有大量的微小的细胞碎片,高速离心澄清难以分离,影响了VLPs的得率、纯度以及澄清度.本研究考察了超声波破碎、玻璃珠研磨破碎以及高压均质破碎等不同破碎方法,发现1 300 bar高压均质法对重组表达PCV Cap蛋白的马克斯克鲁维酵母破碎效果最佳.在此基础上,检测添加有机溶剂、表面活性剂和化学絮凝剂的处理效果,发现添加1％(质量分数)Triton X-100对酵母破碎菌液具有65％以上的浊度降低率,处理后样品可直接用于离子交换层析,得率大于92％,HPLC纯度大于85％.