猪细小病毒VLPs供外源蛋白插入的候选位点发现及其重组PCV2-ORF2的病毒样颗粒构建

• 作者: 张博 徐志文 朱玲 熊丁杰 王印 蒋清蓉 赵玲 郭万柱
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细小病毒 猪圆环病毒2型 病毒样颗粒 重组
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 431-436
• 分类号: S8
• 字数: 4974字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.03.004

摘要

先将猪细小病毒(PPV)SC-1株VP2基因扩增产物克隆到pMD18-T载体构建质粒pMD-VP2;设计两对引物(分别引入Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个酶切位点)扩增猪圆环病毒二型(PCV2)SC株ORF2基因,构建了pMD-ORF2.A和pMD-ORF2.B两质粒;经相应内切酶酶切后回收目的片段,插入PPV SC-1株VP2基因的Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个特异限制酶切位点处(分别对应于PPV VP2蛋白N端和C端1/3处),得到重组质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B.经鉴定后的质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B用Kpn Ⅰ、BamH Ⅰ和ApaL Ⅰ三酶切,回收含VP2和ORF2基因的目的片段克隆至真核表达载体(pEGFP-C1),得到重组质粒pEGFP.VO.A和pEGFP.VO.B.脂质体法转染重组质粒于Cos7细胞后,采用荧光显微镜和电镜观察基因表达情况,结果仅在转染pEGFP.VO.A的样品中观察到了病毒样颗粒(VLPs).纯化VLPs免疫小鼠,结果显不能产生较好的细胞免疫和针对PPV和PCV2的特异性体液免疫,该结果表明研究中获得了PCV VP1-PCV2ORF2重组VLPs,同时也揭示PPV VPLs的N端1/3适于外源蛋白插入构建重组VLPs

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱玲	四川农业大学动物生物技术中心	151	499	13.0	17.0
2	郭万柱	四川农业大学动物生物技术中心	166	1465	21.0	28.0
3	徐志文	四川农业大学动物生物技术中心	184	909	15.0	20.0
4	蒋清蓉	四川农业大学动物生物技术中心	4	13	3.0	3.0
5	王印	四川农业大学动物生物技术中心	104	558	13.0	18.0
6	赵玲	四川农业大学动物生物技术中心	20	182	7.0	13.0
7	张博	四川农业大学动物生物技术中心	10	18	3.0	3.0
8	熊丁杰	四川农业大学动物生物技术中心	3	9	2.0	3.0