敲除组蛋白去乙酰化酶基因hdac对里氏木霉纤维素酶表达的调控作用

• 作者: 佘炜怡 周娇娇 张珂珂 田生礼 谢宁 邓嘉雯 高云雨
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 里氏木霉 组蛋白去乙酰化酶 基因敲除 突变体
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 基础微生物学
• 页码范围: 88-96
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.190260

摘要

[背景]里氏木霉(Trichoderma reesei)是木霉属中产纤维素酶最具代表性的真菌之一,表观遗传调控是不涉及DNA序列变化的可遗传变化,组蛋白去乙酰化是其中一种.组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)负责脱乙酰化,敲除去乙酰化酶基因可引起菌株孢子、菌丝及纤维素酶活性等的一系列改变.[目的]通过敲除里氏木霉组蛋白去乙酰化酶基因(histone deacetylase,hdac)建立了里氏木霉hdac缺失突变株(T.reesei △hdac),以研究对纤维素酶基因表达的调控作用.[方法]利用Split-Maker技术构建了组蛋白去乙酰化酶基因敲除表达盒,并转化了里氏木霉T.reeseiQM9414.经PCR及Southern blotting验证正确后,对突变体T.reesei △hdac连续7d检测滤纸酶活(filter paper activity,AFP)、羧甲基纤维素钠酶活(carboxymethyl cellulase activity,CMCA),利用RT-qPCR检测纤维素酶及其相关基因cbh1、egl1和xyr1的表达.[结果]突变体T.reesei △hdac两种酶活力均显著高于出发菌株,分别高出8.00、30.00 IU/mL.突变体T.reesei △hdac纤维素酶及其相关基因cbh1、egl1和xyr1的转录水平分别为出发菌株T.reesei QM9414的6.50、6.01和4.51倍.[结论]里氏木霉中纤维素酶的基因表达明显受到组蛋白去乙酰化酶基因(hdac)的调控,这为研究里氏木霉表观遗传调控对纤维素酶的影响提供了新的证据.