过表达miR-153非小细胞肺癌细胞稳转株的构建及鉴定

• 作者: 张月英 杨彤 牛世英 王兆朋 王朝霞 赵国丽 陈为军
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 miR-153 非小细胞肺癌
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 827-831
• 页数: 5页
• 分类号: R-33|R734.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2020.05.006

摘要

目的:构建过表达miR-153的非小细胞肺癌的稳转细胞株,为进一步探讨miR-153在肺癌发生发展中的作用奠定基础.方法:构建具有嘌呤霉素抗性的miR-153慢病毒载体;体外培养非小细胞肺癌细胞系SPC-A-1和A549,加入浓度梯度的嘌呤霉素溶液,筛选出最佳浓度;使用慢病毒转染细胞株,并在转染72h后用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,评价转染效率;体外实验使用PCR检测miR-153在稳转株的表达;稳转株移植裸鼠体内成瘤,取出瘤体后检测瘤体内EGFP和miR-153的表达.结果:完成过表达miR-153慢病毒载体及阴性对照载体的构建;确定嘌呤霉素最佳筛选浓度:在SPC-A-1细胞中的浓度为2.0 g/mL,A549细胞中的浓度为3.0 g/mL;目的基因miR-153被慢病毒成功导入SPC-A-1细胞和A549细胞中,荧光显微镜下能直接观察到EGFP.转染miR-153组和阴性对照组的PCR实验结果显示:在SPC-A-1细胞中,miR-153的表达量为92.9±20.6,明显高于阴性对照组(P=-0.016);在A549细胞中,miR-153的表达量为2624.6±153.4,显著高于阴性对照组(P＜0.001).稳转株能在裸鼠体内形成移植瘤,瘤体内明显有EGFP的表达;与阴性对照组的瘤体相比,移植瘤组miR-153的表达量为显著上调(P=-0.048).结论:成功构建过表达miR-153的非小细胞肺癌的稳转细胞株.