CRISPR/Cas9构建srtA基因敲除的金黄色葡萄球菌

• 作者: 刘旭明 尚天甜 曾巧英 潘阳阳 王萌 蒋成辉
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: CRISPR/Cas9 金黄色葡萄球菌 srtA基因 基因敲除 基因回补
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 253-265
• 页数: 13页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-0195

摘要

利用CRISPR/Cas9技术构建耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300的srtA基因缺失株及回补株,分析其对菌株毒力的影响.设计3对srtA基因sgRNA,以pCasSA为载体,构建pCasSA-sgRNA质粒.经缺陷型金黄色葡萄球菌RN4220菌株修饰后,转入USA300中,检测pCasSA-sgRNA质粒的切割效率.扩增并融合srtA基因左右同源臂并将其插入pCasSA-sgRNA质粒中,构建敲除质粒pCasSA-sgRNA-srtA.敲除质粒经修饰,转入USA300中,筛选并鉴定获得srtA基因缺失株.比较分析srtA基因缺失后对USA300菌株生长,小鼠存活率、器官载菌量及其肾脏组织病理学变化差异.同时,以pLI50质粒为载体,构建回补质粒pLI50-srtA及回补株,验证不同菌株表型是否存在差异.经氯霉素筛选,获得2个基因缺失株.与野生型菌株相比,srtA基因缺失后不影响USA300菌株的生长,但显著降低感染小鼠的死亡率,心脏、肾脏载菌量及肾脏组织病变程度.经srtA基因回补后其功能得以恢复.成功建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300菌株srtA基因缺失株和回补株基因编辑方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾巧英	甘肃农业大学动物医学院	33	326	6.0	18.0
2	潘阳阳	甘肃农业大学动物医学院	40	69	5.0	7.0
3	王萌	甘肃农业大学动物医学院	13	13	2.0	3.0
4	蒋成辉	甘肃农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0
5	刘旭明	甘肃农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0
6	尚天甜	甘肃农业大学动物医学院	1	0	0.0	0.0