金黄色葡萄球菌SarA、IcaA及其融合基因的DNA疫苗构建及在小鼠免疫应答中的初步研究

• 作者: 侯勤龙 吴赛男 李咏梅 杨雨睛 程旭 韩慧明
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: DNA疫苗 真核表达 免疫效果
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 41-50
• 页数: 10页
• 分类号: Q812
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.2001070

摘要

目的:探究SarA-AG、IcaA-AG及IcaA-SarA-AG(Azami Green用AG表示)融合基因的DNA疫苗及对小鼠免疫应答的影响.方法:以金黄色葡萄球菌基因组为模板,通过PCR等反应进行SarA-AG、IcaA-AG及IcaA-SarA-AG融合基因DNA疫苗的构建,将DNA疫苗转染至HeLa细胞,荧光显微镜下观察DNA疫苗的瞬时表达情况,将转染成功2周后的细胞进行基因组提取,PCR检测质粒在染色体上的整合情况.使用AG、SarA-AG(A组)、IcaA-AG(B组)及IcaA-SarA-AG(C组)4组免疫BALB/c小鼠,应用ELISA试剂盒检测小鼠血清中IgG抗体、IL-2、IL-4、IL-13、IFN-γ及TNF-α的分泌情况.结果:成功构建SarA-AG、IcaA-AG及IcaA-SarA-AG融合基因DNA疫苗,荧光显微镜下观察DNA疫苗转染情况,结果显示有绿色荧光.提取细胞基因组PCR检测结果显示未出现目的基因条带.免疫小鼠后,A、B、C组均能够诱导小鼠产生较高水平的IgG抗体.与空白组及空载体AG组相比,A、B组均能分泌较高水平的IL-2 (P ＜0.001)、IFN-γ(P＜0.001)、TNF-α(P ＜0.001)、IL-4(P ＜0.01)及IL-13(P ＜0.01),而C组TNF-α (P ＜0.05)、IL-4(P ＜0.05)及IL-13(P ＜0.05)分泌较少,但差异有统计学意义,细胞因子的分泌随着免疫次数的增加,差异显著增加.空白组及空载体AG组细胞因子无显著差异.结论:成功构建SarA-AG、IcaA-AG及IcaA-SarA-AG融合基因的DNA疫苗,且成功在真核细胞中表达.PCR验证结果证实了DNA疫苗的安全性.DNA疫苗免疫小鼠后可诱导体液免疫应答和以Th1细胞为主的细胞免疫应答,具有较好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李咏梅	北华大学医学院	37	99	6.0	8.0
5	韩慧明	北华大学医学院	7	57	3.0	7.0
9	侯勤龙	北华大学医学院	2	0	0.0	0.0
13	程旭	北华大学医学院	2	0	0.0	0.0
14	杨雨睛	北华大学医学院	1	0	0.0	0.0
15	吴赛男	北华大学医学院	1	0	0.0	0.0