黄鳝atrogin-1蛋白表达及细胞定位研究

• 作者: 刘泽军 夏中曦 王兆广 王雨 范玉顶 钟其旺
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 黄鳝 atrogin-1 原核表达 纯化 细胞转染 细胞定位
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 154-160
• 页数: 7页
• 分类号: S917
• 字数: 5811字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2020.05.020

摘要

为提高黄鳝养殖效率以及肌肉的质量,进一步发掘黄鳝肌肉发育相关基因,以atrogin-1为研究对象,构建了3种原核表达载体:pCold-TF-atrogin-1、pET28a(+)-atrogin-1及pGEX6P-1-atrogin-1.将构建的重组表达载体转入Transetta(DE3)感受态细胞,重组菌株经诱导表达后,仅pCold-TF-atrogin-1/Transetta(DE3)菌株表达出可溶性较高的重组蛋白.IPTG诱导试验结果表明,诱导剂浓度对蛋白质表达可溶性及含量几乎没有影响,诱导时间在20 h最佳.可溶性部分经Ni-NTA柱亲和层析纯化以及SDS-PAGE(10％聚丙烯酰胺)电泳,证实获得了重组蛋白.构建真核表达载体pEGFP-N1-atrogin-1,转染293T细胞,结果表明,atrogin-1融合蛋白在细胞质及细胞核中均有表达,且在细胞核中表达量相对较高.