猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用

• 作者: 刘恒贵 刘欢欢 刘璐 姜立波 王宁 谨瑾 辛九庆
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪肺炎支原体 单克隆抗体 P97蛋白 表位鉴定
• 年，卷（期）: 2020,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1110-1118
• 页数: 9页
• 分类号: S852.62|R375.2
• 字数: 5634字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.05.022

摘要

为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycop lasma hyop neumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段(P97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂交瘤细胞株A3.鉴定结果显示,A3 MAb是IgG1亚类,轻链为K链.Western blot结果显示A3 MAb能够和原核表达纯化的P97CR1蛋白特异性反应,并且在流式细胞仪分析中能够识别天然的Mhp.通过逐渐截短表达分析该MAb识别的表位序列为LDDNLQ,该抗原表位在Mhp菌株中高度保守.阻断ELISA初步试验结果显示,A3 MAb与蛋白抗原的结合能够被Mhp高免阳性血清阻断.该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的Mhp阻断ELISA检测方法奠定了基础.