基于piggyBac转座子系统构建长期表达人细胞因子的免疫缺陷小鼠模型

• 作者: 吕亚楠 胡正 范伟
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 免疫系统人源化小鼠 白细胞介素6 白细胞介素3 白细胞介素15 干细胞生长因子 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 转座子
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 176-181
• 页数: 6页
• 分类号: R-332
• 字数: 4429字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20200131

摘要

目的:探讨表达人白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素3(IL-3)、白细胞介素15(IL-15)、干细胞生长因子(SCF)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的piggyBac(PB)转座子系统在免疫缺陷小鼠体内的长效表达情况,为改善人源化小鼠模型中人免疫细胞的重建提供简单长效的新方法.方法:构建含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的PB转座子质粒(PB-GFP),构建含有人IL-6、IL-3、IL-15、SCF和GM-CSF基因的PB转座子质粒(PB-5F).293T细胞分为阴性对照组(未转染质粒)、阳性对照组(转染pLVTHM质粒)、瞬时转染组(转染PB-GFP质粒)和稳定转染组[共同转染PB-GFP和转座酶质粒(super-PB)].转染后每3 d,采用流式细胞术检测各组细胞中GFP阳性(GFP+)细胞百分率.将NOD.Cg-Prkdcscid IL2rgtm1Wjl/SzJ(NCG)小鼠分为瞬时转染组和稳定转染组,瞬时转染组小鼠尾静脉高压注射PB-5F质粒,稳定转染组小鼠尾静脉高压注射PB-5F质粒和super-PB质粒.小鼠尾静脉高压注射后1、3、5和9 d及随后每周1次采血分离血清,ELISA法检测各组NCG小鼠血清中IL-6、IL-3、IL-15、SCF和GM-CSF水平.结果:PB-GFP转染293T细胞30 d后,稳定转染组GFP+细胞百分率(4.61％±0.42％)明显高于阳性对照组(0.58％±0.05％)和瞬时转染组(0.86％±0.10％)(P<0.05).NCG小鼠尾静脉高压注射PB-5F质粒,注射后第30天,稳定转染组小鼠血清中IL-6、IL-15和GM-CSF水平均高于瞬时转染组(P=0.048,P=0.051,P=0.045);注射后第60天,稳定转染组小鼠血清中仍能检测到IL-6、IL-15和GM-CSF.结论:体外验证了PB转座子系统的长效表达,成功构建了具有人IL-6、IL-3、IL-15、SCF和GM-CSF基因的PB转座子载体的质粒,建立了长效稳定表达人IL-6、IL-15和GM-CSF的免疫缺陷小鼠模型.