重组溶瘤痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+的构建及其杀瘤活性

• 作者: 唐慧 方敬敬 李丹洋
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 溶瘤痘病毒 同源重组 CCL5 SSTR2
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 460-468
• 页数: 9页
• 分类号: Q78|Q812|Q33
• 字数: 4748字
• 语种: 中文

摘要

目的 在体外构建携带CCL5和SSTR2双基因的重组溶瘤痘病毒,并初步检测其溶瘤活性.方法 利用基因工程策略,分步构建重组痘病毒真核表达质粒pSC65-CCL5-SSTR2-Luc+;经同源重组痘病毒Western Reverse(WR)株和23轮筛选纯化后,获得纯化的重组溶瘤痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+;经扩大培养及浓缩纯化后获得高滴度的重组溶瘤痘病毒,用ELISA和Western blot分别验证感染重组溶瘤痘病毒的HeLa细胞CCL5和SSTR2的表达变化;用CCK-8法检测了rVV-CCL5-SSTR2-Luc+对两株肿瘤细胞系的杀伤活力.结果 成功构建了重组痘病毒真核表达质粒pSC65-CCL5-SSTR2-Luc+;经同源重组、筛选纯化和浓缩后,获得滴度为9.4×108 PFU/mL的重组溶瘤痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+;ELISA和Western blot结果表明,HeLa细胞感染rVV-CCL5-SSTR2-Luc+后,其CCL5和SSTR2蛋白表达水平显著高于对照组rVV-Luc+(分别为P<0.05和P<0.01);CCK8结果表明,rVV-CCL5-SSTR2-Luc+对人胚肾上皮细胞HEK293T杀伤活力极低,而rVV-CCL5-SSTR2-Luc+对两株肿瘤细胞系的杀伤活力均随感染时间逐渐增强.并且rVV-CCL5-SSTR2-Luc+对肿瘤细胞的杀伤活力较之对照组rVV-Luc+均显著升高(HCT116:感染48 h时P<0.05;Hela:感染48 h时P<0.05,72 h时P<0.01).结论 本研究成功构建并获得了纯化的重组痘病毒rVV-CCL5-SSTR2-Luc+,并初步验证了其杀瘤活性,为开展后续体内外实验奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐慧	云南省第一人民医院/昆明理工大学附属医院临床基础医学研究所云南省临床病毒学重点实验室	26	52	5.0	5.0