利用CRISPR/Cas9技术制备CD163基因SRCR5序列敲除猪

• 作者: 刘海龙 李新云 李长春 熊友才 谢胜松 赵书红 阮进学 韩晓松 高杨
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: CRISPR/Cas9 CD163(clusterofdifferentiation163) SRCR5(scavengerreceptorcysteine-richdomain5) 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) 体细胞核移植(SCNT)
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1535-1542
• 页数: 8页
• 分类号: S82
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.09.002

摘要

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是养猪(Sus scrofa)业中的重要传染性疾病之一,CD163(cluster of differentiation 163)是PRRS病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)入侵机体的重要受体,其第7外显子编码的SRCR5(scavenger receptor cysteine-rich domain 5)是PRRSV侵染细胞的关键结构域.为生产能够抵抗PRRSV的基因编辑猪,本研究利用CRISPR/Cas9技术,同时将靶向猪CD163内含子6和7的2条小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)与Cas9表达载体转染大白猪的胎儿成纤维细胞(pig embryonic fibroblast cells,PEFs).利用有限稀释法挑选32株单克隆细胞,经PCR扩增与测序鉴定,获得SRCR5序列缺失的PEFs,其中纯合敲除效率为6.25％;随后以CD163基因编辑的纯合细胞为供体细胞进行体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT),获得1头正常存活的SRCR5序列缺失猪.本研究通过2条sgRNA精准敲除靶基因的功能结构域,可为相关研究提供方法学参考,所获得的CD163基因编辑猪可用于后续抗病育种研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵书红		37	259	9.0	14.0
2	李长春		12	52	4.0	7.0
3	谢胜松		6	12	2.0	3.0
4	李新云		8	12	2.0	3.0
5	刘海龙		4	32	3.0	4.0
6	高杨		2	0	0.0	0.0
7	韩晓松		1	0	0.0	0.0
8	熊友才		1	0	0.0	0.0
9	阮进学		1	0	0.0	0.0