牛诺如病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 兰亚莉 孟红丽 师志海 张彬 徐照学 滑留帅 王亚州 王文佳
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛诺如病毒 实时荧光定量PCR 犊牛腹泻 检测
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1728-1736
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 5673字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2020.07.025

摘要

牛诺如病毒(BNoV)是国内新发的犊牛腹泻病原,笔者拟建立检测BNoV的Real-time PCR方法.根据BNoV流行株的RNA聚合酶(RdRp)基因序列设计引物,通过优化反应条件和体系,成功建立基于EvaGreen检测BNoV的Real-time PCR方法.该检测方法的Ct值与标准品模板在2.24×102～2.24×108拷贝·μL-1线性关系良好,相关系数R2=0.997,扩增效率为98.44％;该方法可特异性检出BNoV,对其他犊牛腹泻相关病原呈阴性;最低检测限为22.4拷贝·μL-1;批间和批内的变异系数均小于2％,重复性好.对2017年9月—2019年5月采自河南省的221份犊牛腹泻样本中BNoV的检出率为11.31％(25/221),采样场阳性率为92.86％(13/14).本试验所建方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BNoV的检测和流行病学调查提供了有力手段.