柚皮苷调控miR-199a-5p/ECE1分子轴促进骨损伤修复

• 作者: 刘冲 曹慧 杨彩彩 王震
• 来源期刊: 昆明医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 骨损伤修复 柚皮苷 miR-199a-5p ECE1 成骨分化
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 页码范围: 32-38
• 页数: 7页
• 分类号: R68
• 字数: 4907字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨柚皮苷通过调控miR-199a-5p/ECE1分子轴对骨损伤修复的影响.方法 Western blotting检测ECE1及成骨分化相关标志物的表达水平;RT-qPCR检测miRNAs相对表达水平;双荧光素酶报告基因验证miR-199a-5p和ECE1靶向关系;MTT检测MC3T3-E1细胞增殖活力;碱性磷酸酶(ALP)检测MC3T3-E1细胞成骨分化能力;茜素红染色检测MC3T3-E1细胞矿化情况.结果 柚皮苷处理显著促进MC3T3-E1细胞增殖活力、成骨分化指标Runx2、OPN、BMPs、OC等的表达、ALP活性以及细胞钙化能力水平(P<0.01).其中20 ng/mL浓度处理的效果最优.RT-qPCR检测结果显示,柚皮苷能显著上调miR-199a-5p的表达水平.双荧光素酶报告基因检测结果表明ECE1是miR-199a-5p的一个靶基因;并且,miR-199a-5p靶向下调ECE1的表达.进一步实验表明,敲降miR-199a-5p显著降低柚皮苷对MC3T3-E1细胞增殖活力、ALP活性和钙矿化的促进作用(P<0.01);敲降ECE1显著促进了柚皮苷对MC3T3-E1细胞增殖活力、ALP活性和生物矿化能力的促进作用(P<0.01);柚皮苷处理加同时敲降miR-199a-5p和ECE1组MC3T3-E1细胞增殖活力、ALP活性和钙矿化能力与柚皮苷组无显著差异(P>0.05).对细胞成骨分化标志的检测也证明了上述结果.由此可知,柚皮苷通过上调miR-199a-5p对ECE1靶向下调作用,进而促进MC3T3-E1细胞增殖活力、成骨分化和矿化能力.结论 柚皮苷处理显著促进了MC3T3-E1细胞的成骨分化水平;这种作用是通过上调miR-199a-5p/ECE1分子轴实现的.