腺相关病毒介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞的实验研究

• 作者: 刘太祥 田祥 罗鑫 鲍庆东
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 腺相关病毒 增强型绿色荧光蛋白 豚鼠巩膜成纤维细胞 基因转染
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1029-1032
• 页数: 4页
• 分类号: R778.1
• 语种: 中文

摘要

目的 比较四种不同血清型腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞(guinea pig scleral fibroblast,GSF)的转染效率及安全性,筛选合适的基因转染载体.方法 原代分离培养GSF并鉴定,利用AAV2、AAV5、AAV8、AAV9介导EGFP基因并按不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)10、100、1000、10000转染GSF,空白对照组加入空白培养基,转染后2 d、3 d、4 d、5 d荧光显微镜下观察GFP表达强度及细胞生长状态,流式细胞术检测细胞转染率及凋亡率,CCK-8法检测细胞活力.结果 AAV感染GSF后2 d各组均可见弱荧光,荧光强度随时间延长及MOI值增大而增强,而AAV9-EGFP组全程弱荧光,空白对照组全程无荧光.转染后5 d,MOI=10000时各组荧光最强,基因转染率组间整体比较,差异具有统计学意义(P<0.05);组间两两比较,AAV8-EGFP组均高于其他各组,差异均有统计学意义(均为P<0.05).各组Annexin V阳性凋亡率与空白对照组比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05).各组在450 nm波长处光密度值与空白对照组比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05).结论 AAV8能有效地转染GSF,且对细胞凋亡、细胞活力无明显影响,是安全可行的.