磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C的异源表达和应用

• 作者: 关锋 周小满 崔文璟 林美璇
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C 蜡样芽孢杆菌 密码子优化 酶切
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 81-87
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0630

摘要

旨在研究大肠杆菌产磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)的发酵表达和分离纯化,探究PI-PLC酶切GPI锚定蛋白的效果.依据NCBI数据库中蜡样芽孢杆菌的PI-PLC的基因序列,按照大肠杆菌的密码子偏好性进行密码子优化,合成相应基因序列并构建基因表达载体pGEX-6P-1-PI-PLC.将重组质粒转入受体菌E.coli BL21(DE3)中,通过加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因PI-PLC表达.经检测,含有GST标签的PI-PLC融合蛋白以可溶蛋白形式存在于菌体破碎上清,分子量约为61 kDa,与预期相符.初步优化诱导表达条件后,发现最佳诱导表达条件为:以接种量5％ 接种体积分数接种,待菌体生长至OD600nm达到0.5,在16℃条件下以0.3 mmol/L浓度IPTG诱导24 h.利用GST标签对蛋白进行纯化,纯化后的PI-PLC质量浓度为0.52 mg/mL,比酶活为1322.5 U/mg.利用PI-PLC酶液对哺乳动物细胞表面的模式GPI锚定蛋白CD59进行酶切,酶切作用显著.因此,下一步可以将PI-PLC融合蛋白应用于细胞生物学中对GPI-APs的研究和鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔文璟	江南大学生物工程学院	29	77	6.0	7.0
2	关锋	西北大学生命科学学院	6	5	1.0	2.0
3	林美璇	江南大学生物工程学院	1	0	0.0	0.0
4	周小满	江南大学生物工程学院	1	0	0.0	0.0