锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶基因的克隆表达与免疫原性分析

• 作者: 何龙 冉荣坤 刘云秋 刘菊枚 李国清 李秀 杭建雄 赵琪 颜欣欣 黄岳
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 锡兰钩虫 谷胱甘肽-S-转移酶 基因克隆 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1361-1365
• 页数: 5页
• 分类号: S852.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.07.17

摘要

为了克隆表达锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶(Ace-GST)基因,制备多克隆抗体并分析其免疫原性,为疫苗候选分子的筛选奠定基础.根据GenBank上锡兰钩虫GST基因序列设计引物,利用RT-PCR法扩增AceGST基因,将扩增产物克隆至pET-32a载体并转入E.coli BL21 (DE3)宿主菌表达,重组蛋白纯化后免疫昆明小鼠,分别用间接ELISA法和MTT法检测免疫鼠血清IgG抗体水平与脾淋巴细胞增殖情况.结果 显示Ace-GST基因ORF全长468 bp,编码155个氨基酸,与v类GSTs聚为同一分支;重组Ace-GST相对分子质量为36 000,可诱导产生特异性IgG抗体,并能显著刺激免疫小鼠脾淋巴细胞增殖.结果 表明重组Ace-GST蛋白能诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答,具有良好的免疫原性.