miR-28-5p靶向Nrf2调控LPS诱导的急性肺损伤机制研究

• 作者: 么春艳 孙金军 张秀军 陶晓东
• 来源期刊: 浙江中西医结合杂志
• 关键词: 小鼠 miR-28-5p 急性肺损伤 巨噬细胞 炎症
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 963-967,976
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

目的 探究miR-28-5p在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)进程中的作用和分子机制.方法 将40只C57BL/6雄鼠按随机数字表法分为生理盐水组、ALI-3h组、ALI-6h组和ALI-12h组,每组10只.利用LPS诱导小鼠ALI 3h、6h、12h,取肺组织进行荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-28-5p表达;同时体外利用LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7发生炎症反应,RT-PCR检测细胞miR-28-5p表达;巨噬细胞过表达miR-28-5p mimic后利用LPS刺激,RT-PCR检测巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)表达情况;RT-PCR和Western blot检测抗氧化关键分子核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO1)表达水平;Targetscan 7.0预测miR-28-5p靶向基因,突变结合位点后,并通过荧光素酶报告基因系统检测miR-28-5p对靶基因的转录调控作用.结果 与生理盐水组比较,LPS诱导小鼠ALI 3h、6h、12h TNF-α、IL-1β水平明显升高[TNF-α: (6.24±1.84)、(4.31±0.97)、(2.97±0.49)比(1.00±0.21),P＜0.05;IL-1β:(6.29±1.06)、(4.95±0.93)、(3.59±1.05)比(1.00±0.53),P＜0.05)],肺组织miR-28-5p水平明显升高[(7.24±1.35)、(5.26±1.64)、(3.24±0.97)比(1.00±0.34),P＜0.05];与生理盐水组比较,LPS刺激巨噬细胞炎症反应3h、6h、12h细胞miR-28-5p水平明显升高[(5.21±0.15)、(3.51±0.78)、(2.45±0.41)比(1.00±0.35),P＜0.05];与mimic-NC组比较,巨噬细胞过表达miR-28-5pmimic组细胞炎症因子TNF-α和IL-1β表达水平明显升高[TNF-α:(4.86±0.59)比(1.00±0.52);IL-1β:(3.54±0.41)比(1.00±0.24),P＜0.05];同时与mimic-NC组比较,miR-28-5p mimic过表达组抗氧化关键分子Nrf2及其下游HO-1、NQO1表达明显升高[Nrf2:(5.16±1.03)比(1.00±0.14);HO-1:(4.91±1.08)比(1.00±0.12);NQO1:(5.61±0.80)比(1.00±0.08),P＜0.05];Targetscan 7.0预测发现miR-28-5p靶向Nrf2基因3'UTR序列,荧光素酶报告基因实验进一步明确miR-28-5p通过靶向Nrf2基因3'UTR序列调控其转录.结论 miR-28-5p在LPS诱导的ALI中表达上调,并进一步加剧ALI病理进程,其作用机制可能是通过靶向巨噬细胞Nrf2,从而减弱胞内抗氧化能力,促进炎症因子分泌和巨噬细胞的活化.