沙门菌Hfq依赖型小RNA GcvB靶基因trpE的鉴定

• 作者: 刘丽娟 李晨 杨琦 杨阳 潘永
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鼠伤寒沙门菌 小RNA Hfq β半乳糖苷酶试验 trpE基因
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1777-1782
• 页数: 6页
• 分类号: S855.1|R535
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.09.17

摘要

trpE基因在鼠伤寒沙门菌中编码邻氨基苯甲酸合酶Ⅰ并参与氨基酸生物合成和代谢.为鉴定鼠伤寒沙门菌Hfq依赖型小RNA GcvB所调控的基因trpE,本研究基于前期鼠伤寒沙门菌Hfq基因敲除株及gcvB基因敲除株转录组分析基础上,利用Red同源重组系统构建trpE基因lac融合菌株,并利用P22噬菌体转导技术构建gcvB和Hfq基因单缺失和双缺失菌株,通过β半乳糖苷酶试验检测trpE基因在不同情况下蛋白表达活性,结合生物信息学系统TargetRNA2预测GcvB R1区与trpE mRNA的作用位点.结果 表明,与野生型菌株相比,gcvB基因敲除导致trpE基因蛋白表达量增加1.2倍,Hfq基因敲除后表达量增加1.1倍,而双敲除增加量仅为0.5倍.Target RNA2预测trpE mRNA与GcvB R1区可形成8个连续或18个不连续的碱基互补.以上结果表明trpE基因受GcvB和Hfq调控,且极大可能受GcvB直接调控.本研究为鼠伤寒沙门菌GcvB的作用机理研究奠定理论基础,丰富了GcvB的靶基因数目.