敖汉细毛羊Noggin基因质粒的构建及其在成纤维细胞中表达量的研究

• 作者: 张梦瑶 李晶 柳楠 荣恒 贺建宁
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 敖汉细毛羊 Noggin基因 成纤维细胞 转染 实时荧光定量PCR Western Blot
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 88-93
• 页数: 6页
• 分类号: S826.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.20190905-05

摘要

本实验旨在构建敖汉细毛羊Noggin基因表达载体,将其转染至成纤维细胞中,分析Noggin基因mRNA及蛋白表达量的变化.实验以40日龄胎羊为研究对象,采集组织样品,通过PCR反应扩增目的 基因片段,经切胶回收后连接到pEM-T1载体,构建pEM-T1-Noggin后转染到大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞,提取pEM-T1-Noggin后进行酶切鉴定.鉴定后符合标准即可构建pcDNA3.1-Noggin重组表达载体,转至大肠杆菌(E.coli)DH5α感受态细胞振荡培养,将重组质粒pcDNA3.1-Noggin转染成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测Noggin基因在成纤维细胞中表达量的变化.结果 表明:经酶切、测序鉴定pcDNA3.1-Noggin表达载体构建成功,并成功瞬时转染成纤维细胞,转染组的mRNA及蛋白表达量均极显著高于对照组.本研究在细胞水平上验证了Noggin基因功能,为进一步在个体水平上研究Noggin基因功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳楠		58	219	8.0	10.0
2	李晶		8	28	3.0	5.0
3	贺建宁		32	104	6.0	8.0
4	张梦瑶		13	10	2.0	3.0
5	荣恒		2	0	0.0	0.0