FADV-4环介导等温扩增-HNB可视化检测方法的建立和应用

• 作者: 姜朕元 赵艳 王婷 张静 周海洋 李佳康 黄雪琳 黄勇 韩新锋
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 关键词: I群禽腺病毒血清4型 六邻体蛋白基因 环介导等温扩增 羟基萘酚蓝 可视化 检测
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 65-69,76,175
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2020.01.0141

摘要

为了建立简便、快速的FADV-4环介导等温扩增(LAMP)可视化检测方法,试验以FADV-4高度保守的基因序列hexon基因为靶基因设计了6条引物,对反应体系的Mg2+浓度、Bst DNA聚合酶用量、反应温度、反应持续时间进行优化,考察了优化体系的灵敏度及特异性.同时用建立的FADV-4 LAMP及LAMP-HNB可视化的检测方法对临床模拟样品进行检测.结果表明当Mg2+浓度为6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为320 U/mL、反应温度为65℃、反应时间为60 min、HNB使用浓度为120μmol/L时反应最优.LAMP最低DNA检测浓度为1.46 pg/μL,灵敏度是PCR的100倍,临床模拟样品LAMP、LAMP-HNB检测结果与普通PCR检测结果完全符合.说明所建立的FADV-4 LAMP-HNB可视化检测方法适用于临床的快速诊断.