稳定表达Venus基因的重组猪瘟病毒的构建

• 作者: 孙慧敏 仇华吉 李素 李永锋
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 关键词: 猪瘟病毒 Venus基因 重组病毒 稳定性 荧光强度 感染效率
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 67-71,80,158-159
• 页数: 1页
• 分类号: S852.65+1|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.12.0105

摘要

为了利用CRISPR/Cas9技术高通量筛选介导猪瘟病毒入侵的功能性受体,试验首先用融合PCR技术,将Venus基因融合至Npro蛋白的第13位与14位氨基酸之间,获得全长感染性克隆pCSFV-Venus;之后将pCSFV-Venus转染至SK6细胞拯救重组猪瘟病毒(rCSFV-Venus),并将拯救的病毒感染猪肾细胞(PK-15细胞)进行连续传代观察其稳定性;最后将rCSFV-Venus和表达EGFP的重组病毒rCSFV-EGFP以相同剂量感染PK-15细胞,通过流式细胞仪分析荧光强度及感染效率.结果 表明:rCSFV-Venus全长感染性克隆构建成功;转染后传至第4代可观察到绿色荧光,表明重组病毒拯救成功;将拯救的病毒连续传代10代,每代感染的PK-15细胞都可观察到绿色荧光,表明重组病毒具有良好的稳定性;流式细胞仪分析结果表明,rCSFV-Venus比rCSFV-EGFP荧光强度强且感染效率高.说明本研究成功拯救了稳定表达Venus基因的rCSFV-Venus,为筛选介导CSFV入侵的功能性受体提供了有力工具.