牛疱疹病毒Ⅰ型gD蛋白的表达、纯化及抗原性检测

• 作者: 翟璐 杨思宇 肖雪 黄艳梅 张海威 宋佰芬
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 关键词: 牛疱疹病毒Ⅰ型 gD蛋白 原核表达 糖基化修饰 蛋白免疫印迹
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 76-80,160
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.11.0163

摘要

为了能表达出具有良好免疫原性的牛疱疹病毒Ⅰ型(BoHV-1)gD蛋白,为进一步建立BoHV-1检测方法奠定基础,试验将BoHV-1 gD蛋白的基因片段通过PCR扩增、连接、转化的方法连接到pGEX-6P-1载体上,经过单双酶切鉴定、PCR鉴定后测序.测序结果与NCBI上公布的BoHV-1 gD蛋白的氨基酸序列进行对比,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及ELISA检测方法对蛋白质表达情况、抗原性进行检测分析.结果 表明:gD基因成功插入pMD18-T载体中,将测序结果与已经发表在NCBI上的BoHV-1 gD蛋白基因比对,相似性为98％,共有19个碱基发生突变,并无碱基插入或缺失.通过软件翻译与原始氨基酸序列(AFB76672.1)进行比对,共有8个氨基酸发生突变.将gD基因插入pGEX-6p-1载体中,命名为pGEX-6p-gD质粒,构建的pGEX-6P-gD/ BL21 (DE3)重组菌表达出的蛋白质与目的蛋白质大小一致,且该蛋白质免疫后小鼠血清特异性识别BoHV-1.说明本试验成功表达出具有部分免疫原性的BoHV-1重组gD蛋白.