黄酒多肽的多级分离纯化及其对小鼠巨噬细胞免疫调节的影响

• 作者: 冯瑞雪 史瑛 姬中伟 徐岳正 毛健 许正宏 钱肖华
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 黄酒多肽 结构鉴定 小鼠巨噬细胞RAW264.7 免疫调节活性
• 年，卷（期）: 2020,（13）
• 所属期刊栏目: 营养与保健
• 页码范围: 289-295
• 页数: 7页
• 分类号: TS201.4
• 字数: 5872字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2020.13.046

摘要

本研究以黄酒为原料,通过大孔树脂吸附、凝胶色谱等方法多级分离纯化黄酒中活性肽组分,并探究各级分离肽组分对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响.通过脂多糖LPS(1μg/mL)刺激RAW264.7细胞建立体外炎症模型,以不同浓度的各级分离纯化的黄酒多肽样品进行干预,对NO释放抑制率最高的黄酒多肽组分进行结构分析.结果 表明,可通过大孔树脂初步分离纯化黄酒活性多肽.对3种不同型号大孔树脂的吸附解析性能进行比较,最终选择DA201-C大孔吸附树脂富集黄酒多肽,收集洗脱液旋蒸冻干后获得黄酒多肽SJ组分.采用MTT法检测细胞活力,黄酒多肽SJ作用RAW264.7细胞的安全范围为≤2.5 mg/mL.采用Griess Reagent法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)含量,与LPS模型组相比,黄酒多肽SJ浓度为0.3、0.6、1.2、2.5 mg/mL时能明显抑制NO释放(抑制率分别为20.85％、36.42％、68.58％、95.01％).黄酒多肽SJ经Sephadex G-15凝胶色谱柱分离得到3个组分即G1、G2、G3,分别收集这三组洗脱峰并测定其对RAW264.7细胞NO分泌量的影响.研究发现G1组分活性高于其他2种组分,G1、G2、G3的NO释放半抑制浓度分别是0.68、0.86、0.75 mg/mL.对G1组分进行氨基酸组成分析得知其疏水氨基酸占比32.63％,必需氨基酸占比28.46％.研究结果证明黄酒多肽能显著抑制LPS诱导的RAW264.7分泌NO,对LPS刺激的RAW264.7细胞炎症具有保护作用,从而促使巨噬细胞发挥免疫作用.