闹羊花ISSR-PCR反应体系建立及优化

• 作者: 史艳财 唐健民 熊忠臣 蒋运生 覃芳 邹蓉
• 来源期刊: 北方园艺
• 学科: 生物学
• 关键词: 闹羊花 ISSR-PCR反应体系 正交实验 单因素试验
• 年，卷（期）: 2020,（21）
• 所属期刊栏目: 中草药
• 页码范围: 96-102
• 页数: 7页
• 分类号: Q943
• 语种: 中文
• DOI: 10.11937/bfyy.20194897

摘要

以闹羊花的叶片为试材,采用正交实验和单因素试验2种方法对闹羊花ISSR-PCR反应体系的主要影响因子(Taq DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA、引物、Mg2+以及反应程序)进行了优化组合.以期为深入开展闹羊花种质资源遗传多样性的研究提供参考依据.结果 表明:闹羊花ISSR-PCR反应体系中各组分的Taq DNA聚合酶用量为2.5U,引物浓度为0.2 μmol·L-1,Mg2+浓度为1.0 mmol·L-1,dNTPs浓度为0.4 mmol·L-1,模板DNA浓度为60 ng,10×Buffer为2μL,以纯水补足反应总体积至20 μL.扩增程序为94℃条件下预变性5 min;94℃条件下变性30 s,49.6℃条件下退火30 s,72℃条件下延伸30 s,以上3个步骤循环45次,最后72℃延伸5 min.