鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒二重PCR检测方法的建立

• 作者: 张民秀 张艳芳 曾婷婷 李丹 李孟 王盛 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡细小病毒 H9亚型禽流感病毒 二重PCR
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 动物科学·生物技术
• 页码范围: 113-116
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3836字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2020.09.031

摘要

[目的]建立一种能够同时诊断鸡细小病毒(chincken parvovirus,ChPV)和H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的检测方法.[方法]根据GenBank中已发表的ChPV NS基因、H9亚型AIV HA基因的保守序列,分别设计多对引物,并通过一系列不同组合对温度和反应体系的调整试验,最终筛选出2对最佳特异性引物组合,建立了ChPV和AIV二重PCR检测方法用于ChPV和H9亚型AIV的检测.[结果]特异性和敏感性的试验结果表明,建立的二重PCR方法特异性良好,可以在一管PCR反应同时检测ChPV和H9亚型AIV.针对ChPV NS基因和H9亚型AIV HA基因的扩增片段大小分别为558和367 bp,其他常见的禽病病原体均未见阳性反应;该法对ChPV和H9亚型AIV的检测下限均为5×104拷贝/μL质粒;临床样品检测结果表明,对140份临床样品检测结果与AIV分离测序及ChPV PCR阳性产物测序结果完全一致.[结论]建立的ChPV和H9亚型AIV二重PCR检测方法不仅特异性良好,而且检测的灵敏度高,对ChPV和H9亚型AIV的监测及有效防控具有重要意义.